Detección “in vivo” mediante RAPD de alteraciones en el ADN producidas por benzo(a)pireno

C. Becerril, H. Acevedo, M. T. Llorente, A. Castaño

 

Resumen

La técnica de RAPD (Amplificación al Azar de ADN Polimórfico) permite detectar alteraciones inespecíficas en el ADN procedente de células que poseen una dotación genética idéntica, como son las líneas celulares establecidas, mediante la comparación del patrón de bandas de las células expuestas y no expuestas a la acción de genotóxicos.

En los últimos años hemos desarrollado una metodología sensible y reproducible utilizando la línea celular RTG-2, derivada de trucha arco iris (Oncorhynchus mykiss). Sin embargo, es preciso comprobar la capacidad predictiva de este ensayo mediante estudios in vivo. La línea celular RTG-2, como se ha evidenciado en trabajos anteriores, presenta una gran similitud genética con la especie de la que procede. Por ello, en este trabajo, se ha llevado a cabo una exposición subletal a benzo(a)pireno mediante inyección intraperitoneal de 69 μg/g de p.c. en alevines de trucha arco iris, valorando la aparición de mutaciones mediante la comparación del patrón de bandas obtenido a partir del ADN de células de sangre periférica, a diferentes tiempos (1 – 3 meses). Debido a que la presencia de bandas polimórficas dificulta el análisis entre los grupos de individuos tratados y no tratados, las comparaciones se realizaron en un mismo individuo antes y después del tratamiento. Los análisis cualitativos y cuantitativos mostraron tanto la aparición de nuevas bandas, como alteraciones en su intensidad confirmando, de esta manera, los resultados que previamente habíamos obtenido in vitro tras exposiciones a este mismo genotóxico.

Palabras clave

genotoxicidad; RAPD; huella genética ADN; B(a)P; trucha arco iris
pdf